靶向hTERT、hTR新型RNAi表达框架的构建及应用效果观察 - 李亚红; 赵丹丹; 黄丹; 刘蕾; 朱文琦; 彭剑雄 (中国普通外科杂志; 卷 25, 编号 12 (12 2016), 2016)
目的：构建靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架，探讨单独及联合干扰hTERT、hTR基因对肿瘤细胞端粒酶活性、细胞凋亡及周期的影响，以期找到肿瘤基因治疗的新策略。方法：融合PCR构建靶向hTERT、hTR的RNAi表达框架。各表达框架经鉴定后分别或联合转染A549细胞，TRAP-银染法及TRAP-qPCR法检测端粒酶活性，流式细胞仪检测细胞凋亡及周期。结果：靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架构建成功。与空白对照组或阴性对照组比较，无论转染靶向hTERT或靶向hTR的RNAi表达框架后，A549细胞的端粒酶活性均明显降低，细胞凋亡率均明显增加，细胞G1阻滞明显增加，而联合转染靶向hTERT与靶向hTR的RNAi表达框架后，A549细胞的上述改变较各自单独转染更为明显（均P<0.05）。结论：靶向hTERT、hTR的新型RNAi表达框架能够有效抑制A549细胞的端粒酶活性，诱导细胞凋亡，改变细胞周期。以人工miRNA表达框架为基础的新型RNAi技术有望成为肿瘤基因治疗的新工具。